Qiagen 51304 基因組DNA小提試劑盒科研應用指南

——高效、高純度基因組DNA提取的標準化解決(jue) 方案

一、產(chan) 品原理與(yu) 核心優(you) 勢

1.1 技術原理

矽膠膜離心柱技術：

選擇性結合DNA（>100 bp），高效去除蛋白質、RNA及小分子汙染物

基於(yu) pH調控的吸附/洗脫機製（裂解液pH=8.0，洗脫液pH=8.5）

關(guan) 鍵步驟：

細胞裂解（蛋白酶K+Buffer ATL）

核酸吸附（Buffer AL+乙醇）

雜質去除（Buffer AW1/AW2洗滌）

DNA洗脫（Buffer AE或水）

1.2 性能參數

指標 Qiagen 51304 傳(chuan) 統酚-氯仿法

得率（哺乳動物細胞） 5-10 μg/10⁶ cells 3-8 μg/10⁶ cells

A260/A280 1.7-1.9 1.6-1.8（常含酚殘留）

操作時間 20-30分鍾 2-3小時

最大樣本量 5×10⁶ cells或25 mg組織 需分多次處理

1.3 適用樣本類型

推薦樣本：

✓ 培養(yang) 細胞（貼壁/懸浮）

✓ 動物組織（肝、脾等軟組織優(you) 先）

✓ 血液（需配合紅細胞裂解步驟）

不推薦樣本：

✖ 植物組織（需專(zhuan) 用試劑盒）

✖ 石蠟包埋樣本（需脫蠟預處理）

二、標準化操作流程

2.1 實驗前準備

試劑預冷：Buffer AW1/AW2需4℃保存，使用前室溫平衡

樣本預處理：

複製

貼壁細胞：胰酶消化後PBS重懸  

組織樣本：液氮研磨至粉末狀  

2.2 詳細操作步驟

複製

1. 裂解：  

   - 加20 μL蛋白酶K + 200 μL Buffer ATL  

   - 56℃孵育10分鍾（組織需延長至30分鍾）  

2. 結合：  

   - 加200 μL Buffer AL + 200 μL乙醇（96-100%）  

   - 渦旋混勻15秒  

3. 過柱：  

   - 轉移混合液至離心柱，≥6000 g離心1分鍾  

4. 洗滌：  

   - 加500 μL Buffer AW1，離心1分鍾  

   - 加500 μL Buffer AW2，離心3分鍾（確保去鹽）  

5. 洗脫：  

   - 加50-100 μL Buffer AE，室溫靜置5分鍾後離心  

2.3 關(guan) 鍵優(you) 化點

提高得率：

延長組織裂解時間至2小時

二次洗脫（使用同一洗脫液）

提高純度：

增加AW2洗滌離心至5分鍾

洗脫前空離2分鍾去除殘留乙醇

三、質量評估與(yu) 問題排查

3.1 質檢標準

純度合格：A260/A280=1.7-1.9，A260/A230>2.0

完整性驗證：

✓ 0.8%瓊脂糖凝膠電泳，主帶>10 kb（無拖尾）

✓ 適用於(yu) PCR、Southern blot等下遊應用

3.2 常見問題診斷

現象 可能原因 解決(jue) 方案

得率低 /乙醇比例錯誤 增加蛋白酶K用量/檢查乙醇濃度

A260/A280異常 蛋白質或酚殘留 增加AW2洗滌步驟

DNA降解 樣本反複凍融/RNase汙染 使用新鮮樣本/添加RNase抑製劑

3.3 應用案例數據

案例1：小鼠尾尖基因分型

結果對比：

複製

Qiagen 51304：平均得率8.2 μg，PCR成功率98%  

CTAB法：平均得率5.1 μg，PCR成功率85%  

案例2：FFPE樣本提取

優(you) 化方案：

增加蛋白酶K至40 μL，裂解過夜

得率提升3倍（從(cong) 0.5 μg至1.5 μg/10 μm切片）

四、技術問答（Q&A）

Q1：能否用於(yu) 微量樣本（<10⁴ cells）？

需配合 載體(ti) RNA（如Qiagen 1017456） 提高回收率（建議終濃度5 ng/μL）

Q2：洗脫緩衝(chong) 液選擇建議？

Buffer AE：含EDTA，適合長期儲(chu) 存（-20℃）

無菌水：適用於(yu) 立即使用的PCR等應用

文檔優(you) 化建議：

插入 【電泳檢測示例圖】 標注完整性與(yu) 降解DNA區別

添加 得率計算工具 二維碼（鏈接至在線計算器）

關(guan) 鍵步驟用 ⚠️注意 標注（如"勿讓離心柱幹燥"）