Biocolor F2000 彈性蛋白檢測試劑盒科研應用指南

——定量組織與(yu) 細胞外基質中彈性蛋白的精準方案

一、檢測原理與(yu) 產(chan) 品優(you) 勢

1.1 比色法檢測機製

特異性結合：試劑含 磺酸化四唑鎓鹽，與(yu) 彈性蛋白的 非極性氨基酸殘基（如Val, Pro, Gly）選擇性結合，形成 紫色複合物（λmax=513nm）。

動態範圍：0.2-50 μg彈性蛋白/樣本（R²>0.99），靈敏度 0.1 μg（優(you) 於(yu) ELISA法）。

1.2 試劑盒核心組分

組分編號 名稱 作用與(yu) 特性

F2000-A 提取緩衝(chong) 液 含0.25M NH₄OH，溶解交聯彈性纖維

F2000-B 染色試劑 避光保存，反應後OD值與(yu) 濃度呈線性

F2000-C 洗滌液 含0.1% SDS，降低非特異性吸附

1.3 適用樣本類型

推薦樣本：

✓ 皮膚/血管組織勻漿（建議≤50mg濕重）

✓ 細胞培養(yang) 上清（需10倍濃縮）

✓ 病理切片（需配合顯微分光光度計）

二、標準化實驗流程

2.1 樣本前處理

組織提取協議：

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1. 取20mg組織加入500μL F2000-A  

2. 95℃加熱2小時（釋放交聯彈性蛋白）  

3. 12,000g離心10分鍾，取上清檢測  

細胞樣本處理：

使用 F2000-A 裂解後，需通過 10kDa超濾管 濃縮

2.2 檢測步驟

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1. 加樣：  

  - 標準品/樣本各100μL至96孔板（建議複孔）  

2. 染色：  

  - 加入50μL F2000-B，37℃避光振蕩30min  

3. 洗滌：  

  - 用F2000-C衝(chong) 洗3次（每次200μL）  

4. 檢測：  

  - 513nm測OD值（參考波長650nm）  

2.3 數據計算

標準曲線擬合（示例）：

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濃度(μg)   OD513-OD650  

0           0.012  

5           0.328  

10          0.701  

→ 擬合方程：y=0.068x + 0.011 (R²=0.998)  

三、性能驗證與(yu) 問題排查

3.1 質量控製指標

合格標準：

✓ 空白孔OD值<0.05

✓ 標準曲線R²≥0.98

✓ 批內(nei) CV<8%（n=3）

3.2 典型應用數據

案例1：皮膚衰老研究

年輕vs年老小鼠真皮：

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年輕組：12.3±1.2 μg/mg組織  

年老組：6.8±0.9 μg/mg組織（p<0.01）  

案例2：藥物幹預效果

TGF-β抑製劑處理組：

彈性蛋白合成增加 2.4倍（vs對照組）

3.3 故障診斷表

現象 可能原因 解決(jue) 方案

標準曲線線性差 染色時間不足 延長反應至45分鍾

樣本OD值超出範圍 未充分提取 增加加熱時間至3小時

背景值過高 增加至5次洗滌

四、技術問答（Q&A）

Q1：能否檢測彈性蛋白降解產(chan) 物？

可檢測 α-彈性蛋白（使用F2000-A提取），但需注意 elastin peptides 需專(zhuan) 用抗體(ti) 檢測

Q2：與(yu) Masson染色相關(guan) 性？

比色法結果與(yu) Verhoeff染色 陽性麵積顯著相關(guan) （r=0.89, p<0.001），但與(yu) Masson染色無直接可比性

文檔優(you) 化建議：

插入 【標準曲線示例圖】（含95%置信區間）

添加 組織提取操作視頻 二維碼

關(guan) 鍵步驟標注 ⚠️注意（如"避免使用金屬器械"）