Leica FSC22 3801480 冷凍包埋劑科研應用指南

——實現高質量冷凍切片的關(guan) 鍵基質

一、產(chan) 品核心特性與(yu) 原理

1.1 化學組成與(yu) 功能優(you) 勢

水溶性聚合物基質：

主要成分：聚乙烯醇（PVA）與(yu) 羧甲基纖維素複合物

無石蠟/無OCT化合物，避免 冷凍偽(wei) 影 和 冰晶形成

關(guan) 鍵參數：

熔點 -25℃（適配常規冷凍切片機）

粘度 350±50 cP（25℃，確保均勻滲透）

水溶性（後續染色無殘留幹擾）

1.2 與(yu) 傳(chuan) 統包埋劑對比

特性 Leica FSC22 OCT化合物 石蠟

冷凍速度 快（<2分鍾） 中等（5分鍾） 不適用

抗原保存率 >95% ~80% <50%

切片厚度下限 2 μm 5 μm 3 μm

1.3 適用樣本類型

推薦應用：

✓ 脆弱組織（如胚胎、腦組織）

✓ 需免疫熒光（IF）或原位雜交（FISH）的樣本

✓ 脂質豐(feng) 富樣本（避免有機溶劑溶解）

二、標準化操作流程

2.1 包埋前處理

組織預處理：

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1. 4% PFA固定後，用PBS衝(chong) 洗3×5分鍾  

2. 梯度蔗糖脫水（10%-20%-30%，各2小時）  

3. 吸幹表麵液體(ti)  

2.2 包埋步驟

複製

1. 模具預冷：-20℃金屬模具中注入少量FSC22，預凍1分鍾  

2. 組織定向：將樣本置於(yu) 模具中央，滴加FSC22覆蓋  

3. 快速冷凍：  

  - 直接放入液氮蒸氣相（-80℃）10秒  

  - 或置於(yu) 預冷異戊烷（-50℃）中30秒  

4. 儲(chu) 存：-80℃密封保存（避免反複凍融）  

2.3 切片優(you) 化參數

條件 推薦設置

切片機溫度 -18℃至-22℃

刀片角度 5°

切片速度 0.8-1.2 mm/s

三、質量評估與(yu) 問題排查

3.1 切片質量診斷

合格標準：

✓ 切片完整無碎裂（邊緣光滑）

✓ 厚度均勻（CV<5%，顯微測厚儀(yi) 驗證）

✓ 無冰晶空洞（40倍鏡檢）

3.2 常見問題解決(jue) 方案

現象 可能原因 優(you) 化方案

切片卷曲 包埋劑溫度過高 模具預冷延長至2分鍾

組織分層 增加蔗糖濃度至40%

染色背景高 包埋劑殘留 延長PBS衝(chong) 洗至10分鍾

3.3 應用案例數據

案例1：小鼠腦切片（免疫熒光）

結果對比：

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FSC22組：NeuN信號強度比OCT組高30%  

OCT組：非特異性背景染色顯著  

案例2：脂肪肝樣本

脂滴保留率：

FSC22：98% intact

常規冷凍：70-80%

四、技術問答（Q&A）

Q1：能否用於(yu) -80℃長期儲(chu) 存？

可儲(chu) 存 6個(ge) 月（需密封防潮），但建議 -20℃ 保存以維持粘度

Q2：與(yu) 抗體(ti) 滲透性關(guan) 係？

因無疏水屏障，抗體(ti) 滲透速度比石蠟快 3倍（實測IgG達深層組織僅(jin) 需1小時）

文檔增強建議：

插入 【包埋流程示意圖】（標注關(guan) 鍵溫度控製點）

添加 切片厚度驗證方法 視頻鏈接

關(guan) 鍵步驟用 ⚠️警示框 強調（如"避免氣泡混入"）