Abcam Anti-PSMA antibody售後流程

1. 產(chan) 品照片 (包括管壁的批次號、管底的二維碼的清晰照片)

2. 請提供您的實驗結果並描述出現的問題

注意：

· 請在結果圖片中標注準確的蛋白marker位置和大小，並標注每個(ge) 泳道的樣品信息；

· 請附上內(nei) 參蛋白的檢測結果；

· 請用文字語言準確地描述實驗中出現的問題。

目標蛋白出現了兩(liang) 至三條蛋白條帶，且MDA-MB-231細胞中有表達psma蛋白，但pc3細胞應該低表達甚至不表達psma蛋白，卻出現了假陽。

3. 產(chan) 品儲(chu) 存 (溫度和分裝)

· 儲(chu) 存溫度: -20攝氏度

· 是否進行分裝及分裝後每管的體(ti) 積: 未進行分裝

4. 檢測的樣品

· 樣品種屬信息（Human/Mouse/Rat etc.）：Human

· 如果檢測樣品為(wei) 細胞係，請提供細胞係名稱：mda-mb-231細胞，pc3細胞

· 如果檢測樣品為(wei) 組織，請提供組織名稱：

· 是全細胞裂解液還是某一亞(ya) 細胞組分裂解液：全細胞裂解液

5. 裂解液

· 上樣的蛋白總量（μg/lane）： 10-15μg

· 裂解緩衝(chong) 液類型： RIPA裂解液

· 蛋白酶抑製劑：磷酸酶抑製劑混合物，蛋白酶抑製劑混合物

上樣緩衝(chong) 液成分：


· 煮樣溫度和時間：100攝氏度，10min

6. 電泳和轉膜

電泳 ：

· 使用變性膠（SDS-PAGE）還是native膠（native-PAGE）：SDS-PAGE

· 分離膠濃度：8%

轉膜：

· 轉膜方法（濕轉/半幹轉 etc.）：濕法

· 轉膜電流/電壓和轉膜時間：300mA，2h

· 是否用麗(li) 春紅染色檢查過轉膜效率？若有，請提供實驗圖片：否

7.  封閉條件

· 封閉劑成分（脫脂牛奶/BSA etc.）和濃度：5%脫脂牛奶

· 封閉時間和溫度：室溫，2h

8.  一抗

· 一抗稀釋比例：1:1000

· 抗體(ti) 稀釋液：TBST

· 孵育時間和溫度：4攝氏度，10-12h

· 洗液成分（請注明Tween的含量）：TBST, 每1LTBS(1X)加入500μl Tween20

· 洗膜具體(ti) 步驟：每次10min，洗3次

9.  二抗

· 產(chan) 品名稱：Goat Anti-Rabbit IgG(H+L)HRP

· 品牌與(yu) 貨號：南京翼飛雪生物科技有限公司  YFSA02

· 二抗稀釋比例：1:5000

· 孵育時間和溫度：室溫，2h

· 洗液成分（請注明Tween的含量）:TBST, 每1LTBS(1X)加入500μl Tween20

· 洗膜具體(ti) 步驟：每次10min，洗3次

· 是否與(yu) 其它一抗搭配使用沒有問題? 如果是， 請提供相關(guan) 實驗結果：與(yu) 其它一抗搭配使用沒有問題

是

10. 檢測

· ECL/ECL+/其它檢測方法-請說明：ECL

11. 是否使用陽性對照與(yu) 陰性對照? 如果是，請提供相關(guan) 實驗結果。

12. 請確認靶標蛋白在所檢測樣本中的表達情況，並提供相關(guan) 參考文獻或數據庫信息。

The Potential of PSMA as a Vascular Target in TNBC.

13. 是否用過其它同指標產(chan) 品? 如果是，請提供品牌、貨號與(yu) 實驗結果。

無

14. 優(you) 化步驟

· 您使用該投訴產(chan) 品進行過幾次WB：兩(liang) 次

· 是否每次都遇到相同問題（例如每次背景條帶都在相同位置）：是的

· 您已經優(you) 化過哪些步驟：延長封閉時間

廠家郵件回複:

1. 建議嚐試更換封閉液，比如用5%BSA進行封閉:

2. 建議做一個(ge) 不孵一抗、隻二抗的陰性對照，檢測二抗與(yu) 樣本是否存在非特異性結合

客戶重新按照廠家的建議做的結果基本符合實驗要求，售後處理結束。